?檢測黃酮類成分時，使用紫外分光光度計的典型條件如下：
1. 檢測波長選擇
- 直接紫外吸收法：
黃酮類化合物因共軛結構（如苯環、羰基）通常在 250-360 nm 范圍內有特征吸收峰。
- 常見最大吸收波長：
- 黃酮苷元（如槲皮素、山柰酚）：約 260-280 nm（B環吸收帶）和 360-380 nm（A環吸收帶）。
- 黃酮苷（如蘆丁、橙皮苷）：吸收波長可能略向長波方向偏移（如 260-290 nm 和 350-370 nm）。
- 建議：
- 使用標準品進行全波長掃描（200-600 nm），確定樣品的最大吸收波長（λ<sub>max</sub>）。
- 顯色法（如鋁鹽絡合）：
若采用顯色反應（如與AlCl<sub>3</sub>絡合），吸收峰可能移至 400-510 nm（可見光區），但需紫外-可見分光光度計支持。
2. 樣品制備
- 溶劑選擇：
- 常用溶劑：甲醇、乙醇（需確保溶劑在檢測波長處無吸收干擾，如甲醇在 <210 nm 有強吸收）。
- 若使用顯色法，需按方法配制反應液（如甲醇-AlCl<sub>3</sub>體系）。
- 濃度控制：
- 調整樣品濃度使吸光度在 0.2-0.8 之間（符合比爾-朗伯定律線性范圍）。
- 參比溶液：
- 使用純溶劑或空白反應液作為參比，消除背景干擾。
3. 儀器參數設置
- 比色皿材質：
- 紫外區檢測（200-400 nm）：需使用 石英比色皿（玻璃會吸收紫外光）。
- 可見光區檢測（400 nm以上）：可使用玻璃比色皿。
- 狹縫寬度：通常設為 1-2 nm，平衡靈敏度和分辨率。
- 掃描速度：快速初篩可設較快速度，精確測定時降低速度以提高數據精度。
4. 標準曲線繪制
1. 配制系列濃度黃酮標準品溶液（如蘆丁）。
2. 測定吸光度，以濃度（μg/mL）為橫坐標、吸光度為縱坐標繪制標準曲線。
3. 計算回歸方程（如y = ax + b），用于樣品濃度計算。
5. 注意事項
- 干擾物質：
- 樣品中的色素、蛋白質或其他共提取物可能干擾檢測，需通過純化（如大孔樹脂吸附、液液萃取）減少干擾。
- 顯色法特異性：
- 鋁鹽絡合法對黃酮類有選擇性，但仍需驗證方法特異性（如通過HPLC對比）。
- 儀器校準：
- 定期用標準品校準波長和吸光度準確性。
示例流程（以蘆丁測定為例）
1. 樣品提取：乙醇回流提取植物粉末，過濾定容。
2. 顯色反應：取提取液與5% AlCl<sub>3</sub>甲醇溶液等體積混合，靜置10分鐘。
3. 檢測條件：
- 波長：510 nm（顯色后可見光區）。
- 參比：含AlCl<sub>3</sub>的甲醇空白液。
4. 計算：根據蘆丁標準曲線計算總黃酮含量。
總結
- 直接紫外法：快速簡便，適合已知λ<sub>max</sub>的純品分析。
- 顯色法：靈敏度高，適合復雜樣品中總黃酮含量測定。
- 關鍵點：明確檢測目標（單一黃酮或總黃酮），選擇適配波長和方法。
建議參考《中國藥典》或相關文獻（如《植物化學分析》）獲取具體品種的檢測條件。
